文献类型： 中文期刊
作者： 谢树章 1 ; 秦平伟 1 ; 张迷 1 ; 胡雨晴 1 ; 李名扬 1 ; 眭顺照 1 ;
作者机构： 1.西南大学园艺园林学院
关键词： 几丁质酶;克隆;原核表达;蜡梅
期刊名称： 林业科学
ISSN： 1001-7488
年卷期： 2009 年 45 卷 12 期
页码： 39-44
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 在构建好蜡梅花cDNA文库并进行EST分析基础上,通过随机克隆测序,得到1个蜡梅几丁质酶的cDNA基因,命名为Cpchia(GenBank登录号:FJ749130)。CpchiacDNA全长为1184bp,开放阅读框为954bp,编码317个氨基酸,其结构包括信号肽、几丁质结合域、可变交联区、催化区,无C端延伸区,为ClassⅠb型胞外几丁质酶,属于几丁质酶第19家族。将Cpchia克隆到原核表达载体pET-28a(+),在大肠杆菌BL2l细胞中以包涵体形式表达融合蛋白,利用透析法获得复性蛋白,其几丁质酶活性经DNS法检测达到200U.mL-1。酶活性和稳定性分析表明,试验条件下,pH7.0有利于酶的稳定和活性发挥,40℃活性最高,在0℃低温下也有较高活性。上述结果说明,分离的Cpchia基因编码蛋白具有几丁质酶活性,而且可能与蜡梅花的抗寒性形成有关。
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